王老师
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1方法与原理
生化需氧量是指在规定条件下,微生物分解存在水中的某些可氧化物质,特别是有机物所进行化学过程中消耗溶解氧的量.BOD5是指在20 +1 ℃培养5 d分别测定样品培养前后的溶解氧,二者之差即为BOD5值,以氧的mg/L表示,测试范围2 mg/L～6000 mg/L.
2仪器
2.1恒温培养箱（20±1 ℃）
2.2 300 mL细口玻璃瓶
2.3 1000 mL量筒
2.4玻璃搅棒
棒的长度长于普通玻璃棒,在棒的底端固定一个直径比量筒底小,并带有几个小孔的硬橡胶板.
2.5溶解氧瓶：300 mL,带有磨口玻璃塞并且有供水封用的钟形口.
2.6 1、2、5、10、20 mL吸量管：供分取水样和添加稀释水用.
3 试剂
3.1磷酸盐缓冲溶液
将8.5 g磷酸二氢钾,21.75 g磷酸氢二钾,33.4 g七水合磷酸氢二钠和1.7 g氯化铵溶于水中,稀释至1000 mL,此溶液的pH值应为7.2.
3.2硫酸镁溶液
将22.5 g七水合硫酸镁溶于水中,稀释至1000 mL.
3.3氯化钙溶液
将27.5 g无水氯化钙溶于水,稀释1000 mL.
3.4氯化铁溶液
将0.25 g六水合氯化铁（FeCl3•6H2O）溶于水中,稀释至1000 mL.
3.5盐酸溶液
将40 mL（ =1.18 mg/L）盐酸溶于水,稀释至1000 mL.
3.6氢氧化钠溶液（0.5 mol/L）
将20 g氢氧化钠溶于水中,稀释至1000 mL.
3.7亚硫酸钠溶液( =0.025 mol/L)
将1.575 g亚硫酸钠溶于水中,稀释至1000 mL.（此溶液不稳定,需每天配制.）
3.8葡萄糖-谷氨酸标准溶液
将葡萄糖和谷氨酸在103 ℃干燥1 h后,各称取150 mg溶于水中,移入1000 mL容量瓶内稀释至标线,混合均匀.此标准溶液临用前配制.
3.9稀释水
在5-20 L玻璃瓶内装入一定量水.控制水温在20 ℃左右,然后用无油空气压缩机,将吸入的空气经活性碳吸附管及洗涤管后,导入稀释水内曝气2-8 h.使稀释水中的溶解氧接近饱和.放置于20 ℃培养箱中放置数小时.使水中的溶解氧达到8 mg/L左右,临用前每升加入氯化钙、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲液各1 mL,并混合均匀,稀释水的PH值应为7.2.其BOD5应为小于0.2 mg/L.
3.10接种液
城市污水,在室温下放置一昼夜,取上清液使用.
3.11接种稀释水
分取适量接种液,加入稀释水中、混匀.每升稀释水中接种液加入量为：生活污水1～10mL.接种液配置后立即使用.
4 分析步骤
4.1水样的预处理
4.1.1调节pH值
a）水样的PH若超出6.5-7.5范围时,可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节PH近于7,但用量不要超过水样体积的0.5%.若水样的酸度或碱度很高,可改用高浓度的碱或酸液进行中和.保持20 ℃的水样温度.
b）确定稀释倍数：
由重铬酸钾法测定的COD值来确定,通常需做三个稀释比.使用稀释水时,由COD值分别乘以系数0.075、0.15、0.225,即可得三个稀释倍数；使用接种稀释水时,则分别乘以0.075、0.15、0.25三个系数.
c）稀释操作
按照选定的稀释比例,用虹吸沿筒壁先引入部分接种稀释水于1000 mL量筒中.加入需要量的均匀水样.再加入接种稀释水至1000 mL,用带胶板的玻璃棒搅拌均匀,搅拌时防止出现气泡.然后以虹吸法将约20 ℃的混匀水样转移入两个溶解氧瓶内,转移过程中应注意不使产生气泡,以相同的操作使两个溶解氧瓶充满水样后溢出少许,加塞.瓶内不应留有气泡.其中一瓶即测定溶解氧,另一瓶的瓶口进行水封后,放入培养箱,在20 +1 ℃培养5 d,在培养过程中注意添加封口水.5 d后测定其溶解氧.
另外取两个溶解氧瓶用相同的方法装满接种稀释水作为空白试验,其中一瓶即测定溶解氧,另一瓶瓶口进行水封后,放入培养箱,在20 +1 ℃培养5 d,在培养过程中注意添加封口水.5 d后测定其溶解氧.
五 结果计算
经过稀释后的水样的BOD5按下式（4）计算：
……………………（4 ）
式中：
C1——水样在培养前的溶解氧浓度,mg/L；
C2——水样经5 d培养后,剩余溶解氧浓度,mg/L；
B1——接种稀释水在培养前的溶解氧浓度 mg/L；
B2——接种稀释水在培养后的溶解氧浓度,mg/；
f1——接种稀释水在培养液中所占比例；
f2——水样在培养液中所占比例.
