题目内容：

黑胸大蠊是一种生活在我国南方地区的主要卫生害虫，通过生物防治手段可以起到一定抑制虫害的作用。某研究小组对黑胸大蠊浓核病毒的PfDNV基因与pUCl19质粒进行重组构建，通过感染黑胸大蠊研究其病理特征，已知KpnⅠ、PstⅠ、HindⅢ3种限制酶的酶切位点不同，Amp为氨苄青霉素抗性基因，实验过程图解如下。请分析回答下列问题：

（1）纯化后的PfDNV基因可通过___________技术扩增。常将PfDNV基因与pUC119 质粒采取加G—C尾的连接方式构建重组质粒，该加尾的连接方式能使重组质粒的热稳定性___________。

（2）研究小组将获得的重组质粒通过___________法转染大肠杆菌，在含有___________的培养基上培养一段时间后，挑选出部分菌株，用HindⅢ酶解菌株中的重组质粒，经电泳分析后发现有些菌株显示有5kb和3.7kb片段，还有些菌株显示有1.8kb和6.9kb片段，出现这种情况的原因是______________________。

（3）选择可以正常表达的重组质粒PfDNV-pUCl19，利用KpnⅠ酶酶解后回收7.3kb的片段，通过_______的作用获得PfΔKpn-pUC119重组质粒，将两种重组质粒通过腹部注射法注入黑胸大蠊幼虫体内，所得的结果如下表所示。

质粒转染黑胸大蠊实验结果

接种物	接种虫数	感染虫数	感染百分数（%）
PfΔKpn-pUC119
（2500ng）	20	20	100
（1250ng）	20	1S	90
（250ng）	20	17	85
PfAKpn-pUC119
（2300ng）	20	0	0
（1000ng）	20	0	0
野生型病毒	20	20	100
未接种	20	0	0

 

从上表中可以看出，当注射的重组质粒PfDNV-pUCl19的量在___________ng及以上时，虫体最终死亡率与野生型病毒感染的结果—致。PfΔKpn-pUC119重组质粒注射幼虫后没有感染的根本原因是：KpnⅠ酶酶解后再连接，导致______________________。