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植物叶片DNA提取失败的原因是什么,提了两次都没结果①取鲜叶、干叶分别加入0.03 gPVP于研钵中,用液氮将研钵预冷,
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植物叶片DNA提取失败的原因是什么,提了两次都没结果
①取鲜叶、干叶分别加入0.03 gPVP于研钵中,用液氮将研钵预冷,将除去叶脉的叶片放入研钵中,加入液氮将叶片快速研磨至粉末状,迅速转移至1.5ml离心管中,加入冰浴的CTAB缓冲液600ul,混匀,冰浴10min,在4℃、5000 r/min下离心10min,收集沉淀;③在沉淀中加入65℃预热CTAB裂解液600ul混匀,65℃水浴30~40 min,中间轻柔振荡3次;④在溶液中加入5 mol/L KAc 1 ml,混匀,冰浴20min;⑤加入600ul氯仿∶异戊醇=24∶1,轻柔颠倒混匀,乳化10min,于20℃、12 000 r/min下离心10 min,吸取上清液,转入新离心管中;⑥重复⑤1次.对以上方法所得溶液300ul分别加入60ul的3 mol/LNaAc及600ul-20℃预冷的无水乙醇,混匀,冰上沉淀30min;于室温12 000 r/min下离心10min,弃去上清液,将沉淀转入1.5ml离心管中;用75%乙醇漂洗5min,重复1次,再用无水乙醇漂洗5 min,沉淀置于室温下干燥至无酒精味;加入100μlTE溶解沉淀,进行DNA纯化或放入-20℃冰箱备用.
植物叶片DNA提取失败的原因是什么,提了两次都没结果
①取鲜叶、干叶分别加入0.03 gPVP于研钵中,用液氮将研钵预冷,将除去叶脉的叶片放入研钵中,加入液氮将叶片快速研磨至粉末状,迅速转移至1.5ml离心管中,加入冰浴的CTAB缓冲液600ul,混匀,冰浴10min,在4℃、5000 r/min下离心10min,收集沉淀;③在沉淀中加入65℃预热CTAB裂解液600ul混匀,65℃水浴30~40 min,中间轻柔振荡3次;④在溶液中加入5 mol/L KAc 1 ml,混匀,冰浴20min;⑤加入600ul氯仿∶异戊醇=24∶1,轻柔颠倒混匀,乳化10min,于20℃、12 000 r/min下离心10 min,吸取上清液,转入新离心管中;⑥重复⑤1次.对以上方法所得溶液300ul分别加入60ul的3 mol/LNaAc及600ul-20℃预冷的无水乙醇,混匀,冰上沉淀30min;于室温12 000 r/min下离心10min,弃去上清液,将沉淀转入1.5ml离心管中;用75%乙醇漂洗5min,重复1次,再用无水乙醇漂洗5 min,沉淀置于室温下干燥至无酒精味;加入100μlTE溶解沉淀,进行DNA纯化或放入-20℃冰箱备用.
①取鲜叶、干叶分别加入0.03 gPVP于研钵中,用液氮将研钵预冷,将除去叶脉的叶片放入研钵中,加入液氮将叶片快速研磨至粉末状,迅速转移至1.5ml离心管中,加入冰浴的CTAB缓冲液600ul,混匀,冰浴10min,在4℃、5000 r/min下离心10min,收集沉淀;③在沉淀中加入65℃预热CTAB裂解液600ul混匀,65℃水浴30~40 min,中间轻柔振荡3次;④在溶液中加入5 mol/L KAc 1 ml,混匀,冰浴20min;⑤加入600ul氯仿∶异戊醇=24∶1,轻柔颠倒混匀,乳化10min,于20℃、12 000 r/min下离心10 min,吸取上清液,转入新离心管中;⑥重复⑤1次.对以上方法所得溶液300ul分别加入60ul的3 mol/LNaAc及600ul-20℃预冷的无水乙醇,混匀,冰上沉淀30min;于室温12 000 r/min下离心10min,弃去上清液,将沉淀转入1.5ml离心管中;用75%乙醇漂洗5min,重复1次,再用无水乙醇漂洗5 min,沉淀置于室温下干燥至无酒精味;加入100μlTE溶解沉淀,进行DNA纯化或放入-20℃冰箱备用.
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