王老师
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操作步骤
1．称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中.牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯.也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片.蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速.另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错.
2．溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解.待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积.如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂.最后补足所失的水分.
3．调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7．6.反之,则用1mol/L HCl进行调节.注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度.
对于有些要求pH值较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行（使用方法,可参考有关说明书）.
4．过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察.一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去（本实验无需过滤）.
5．分装
按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内.分装装置见图Ⅴ-1.
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染.
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜.
(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图Ⅴ-2.分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜.
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
6．加塞
培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）.
7．包扎
加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好.用记号笔注明培养基名称、组别、日期.三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期.
8．灭菌
将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2）,121．3℃,20分钟高压蒸汽灭菌.如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存.
9．搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜.
10．无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否彻底.
