题目内容：

人类胰岛素基因位于第11号染色体上，长度8416bp，包含3个外显子和2个内含子，人类胰岛素的氨基酸序列已知。回答相关问题：

（1）上图是利用PCR技术获取人胰岛素基因的方法，除了此方法外，还可以利用的方法是____________。

 （2）利用PCR技术获取人胰岛素基因，在缓冲液中除了要添加模板和引物外，还需要添加的物质有_____________________________。

（3）经过______轮循环可以得到所需的目的基因，一个DNA分子经过5轮循环，需要引物A_____个，从PCR的过程和DNA分子的特点，试着写出设计引物需要注意的问题_____、_____（答出2点即可）。

（4）利用SDS-凝胶电泳分离不同DNA分子，迁移速度取决于__________________。

（5）利用图示方法获取的目的基因，直接构建基因表达载体后导入大肠杆菌，（选能或不能） ___________表达出人胰岛素，理由是______________________________。