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下图1表示含有目的基因D的DNA片段及其中部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶。它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓C...
题目内容:
下图1表示含有目的基因D的DNA片段及其中部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶。它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。现要培育含目的基因D的大肠杆菌,请回答下列问题:
(1)为了提高试验成功率,需要通过PCR纩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝,该过程除需目的基因和dNTP (包括dATP、dGTP, dCTP、dTTP)之外还需提供______________。
(2)图2中,启动子的作用是______________.
(3)分别用4种限制酶切割图1中的DNA片段,能形成黏性末端的是______________。
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是___________。为了提高重组质粒导入大肠杆菌的成功率,需将大肠杆菌用___________进行处理。
(5)为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌,首先将大肠杆菌图3所示的培养基上培养,得到如图3的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到图4所示的培养基上培养,得到如图4的结果(空圈表示与图3对照无菌落的位置)。请推测:图3培养基里含的抗生素是_ _,
图4中生长的大肠杆菌中是否有目的基因D?______________。
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