题目内容：

下图为某科研小组采用“基因靶向”技术，对ES细胞进行的遗传改造。先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的胚胎干细胞(ES细胞)中，再将改造后的胚胎干细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。据图分析不正确的是

A.第Ⅱ步使用的工具酶是DNA连接酶以及限制酶

B.完成第Ⅱ步操作，得到由两个DNA片段连接成的产物，必定是载体与棕褐毛色基因形成的重组DNA分子

C.第Ⅲ步操作完成后，还需筛选出目的基因已成功导入的胚胎干细胞，并将该胚胎干细胞注射到囊胚中

D.ES细胞除可进行如图操作外，也可进行冷冻保存