题目内容：

为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656个碱基对），利用基因工程大量制备α-淀粉酶，实验流程见下图。请回答下列问题：

（1）获取α-淀粉酶基因后，对其进行克隆常采用的技术是_________。

（2）为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的_______端（填5’或3’）加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是_______________

（3）进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中________的设定与引物有关，________的设定与扩增片段的长度有关。（填序号）

①变性温度   ②退火温度   ③延伸温度   ④变性时间   ⑤退火时间   ⑥延伸时间

（4）下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列：

图中虚线框内mRNA片段包含______个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有_______ 种。

（5）获得工程菌表达的α-淀粉酶后，为探究影响酶活性的因素，以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性，结果如下：

缓冲液	50 mmol/L Na2HPO4-KH2PO4	50 mmol/L Tris-HCl	50 mmol/L Gly-NaOH
pH	6.0	6.5	7.0	7.5	7.5	8.0	8.5	9.0	9.0	9.5	10.0	10.5
酶相对活性%	25.4	40.2	49.8	63.2	70.1	95.5	99.5	85.3	68.1	63.7	41.5	20.8

 

根据上述实验结果，初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为_________________________ 。